产品简介:
pCMV-C-EGFP是上海华潍自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和EGFP(绿色荧光蛋白)融合的目的
蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的后面有一个EGFP的完整编码序列,因此在多克隆位点插入目的基因后可以表达出含有EGFP的融合蛋白,可以方便地使用EGFP的荧光特性来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
multiple cloning site 678-736
EGFP 741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site 1510-1531
SV40 polyA signal 1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication 2064-2370
bla promoter 2395-2519
SV40 promoter 2539-2877
neomycin/kanamycin resistance ORF 2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3704-4162
pUC origin 4291-4958
pCMV-C-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
XmaI PstI
SacI SacII SmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI EGFP
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA ATGGTGAGCA
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT TACCACTCGT
751 AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT CGAGCTGGAC
TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG GGTAGGACCA GCTCGACCTG
801 GGCGACGTAA ACGGCCACAA GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG GCGAGGGCGA
CCGCTGCATT TGCCGGTGTT CAAGTCGCAC AGGCCGCTCC CGCTCCCGCT
851 TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT CATCTGCACC ACCGGCAAGC
ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA GTAGACGTGG TGGCCGTTCG
901 TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCCTGACCTA CGGCGTGCAG
ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT GGGACTGGAT GCCGCACGTC
951 TGCTTCAGCC GCTACCCCGA CCACATGAAG CAGCACGACT TCTTCAAGTC
ACGAAGTCGG CGATGGGGCT GGTGTACTTC GTCGTGCTGA AGAAGTTCAG
1001 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG CACCATCTTC TTCAAGGACG
GCGGTACGGG CTTCCGATGC AGGTCCTCGC GTGGTAGAAG AAGTTCCTGC
1051 ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG CGACACCCTG
TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT TCAAGCTCCC GCTGTGGGAC
1101 GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC TTCAAGGAGG ACGGCAACAT
CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG AAGTTCCTCC TGCCGTTGTA
1151 CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTACAA CAGCCACAAC GTCTATATCA
GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGATGTT GTCGGTGTTG CAGATATAGT
1201 TGGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG TGAACTTCAA GATCCGCCAC
ACCGGCTGTT CGTCTTCTTG CCGTAGTTCC ACTTGAAGTT CTAGGCGGTG
1251 AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC AGCAGAACAC
TTGTAGCTCC TGCCGTCGCA CGTCGAGCGG CTGGTGATGG TCGTCTTGTG
1301 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAACCAC TACCTGAGCA
GGGGTAGCCG CTGCCGGGGC ACGACGACGG GCTGTTGGTG ATGGACTCGT
1351 CCCAGTCCGC CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA TCACATGGTC
GGGTCAGGCG GGACTCGTTT CTGGGGTTGC TCTTCGCGCT AGTGTACCAG
1401 CTGCTGGAGT TCGTGACCGC CGCCGGGATC ACTCTCGGCA TGGACGAGCT
GACGACCTCA AGCACTGGCG GCGGCCCTAG TGAGAGCCGT ACCTGCTCGA
ApaI KpnI KpnI
1451 GTACAAGTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC AGGTAAGTGT
CATGTTCATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG TCCATTCACA
pCMV-C-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-EGFP)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
BsiW I Bsg I BsiW I BsmB I BspM IIBst1107 IBstE II Ear I
Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I Nru I PflM I
Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap ISca I Spe I
Spl I Xca I
pCMV-C-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-EGFP once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241 |
Bsp120 I G`GGCC,C 1462
Apa I G,GGCC`C 1466
Pvu I CG,AT`CG 1544 |
pCMV-C-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620–639): 5′ AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer (1510-1531): 5′ GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-EGFP的全序列信息:PHWE4403 pCMV-C-EGFP-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。